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Table 1 KRAS codon 12/13 status by HRM and pyrosequencing in 61 CRC samples

From: A rational two-step approach to KRAS mutation testing in colorectal cancer using high resolution melting analysis and pyrosequencing

  

HRM

Pyrosequencing

    

Run 1

Run 2

 

Sample

cDNA [ng/μl]

Run 1

Run 2

Result

% mut. Alleles

Result

% mut. Alleles

Final result

1

11

failed

WT a

WT

   

WT

2

31

WT a

 

WT

   

WT

3

10

WT a

 

G12C

13.4

  

mut

4

93

WT a

 

WT

   

WT

5

26

WT a

 

WT

   

WT

6

27

WT a

 

WT

   

WT

7

10

WT a

 

WT

   

WT

8

43

mut

 

G13D

73.9

  

mut

9

85

failed

WT

WT

   

WT

10

N/A

mut

 

G13D

44.3

  

mut

11

N/A

failed

 

G12V

2.6

  

WT b

12

N/A

WT

 

WT

   

WT

13

N/A

mut

 

G12V

41.9

  

mut

14

126

mut

 

failed

 

G12D

65.7

mut

15

133

mut

 

G12D

74.1

  

mut

16

97

mut

 

G13D

52.8

  

mut

17

47

failed

WT

WT

   

WT

18

14

failed

WT

WT

   

WT

19

44

WT a

 

WT

   

WT

20

20

failed

WT a

WT

   

WT

21

N/A

failed

 

WT

   

WT

22

138

mut

 

G12V

12.9

  

mut

23

325

mut

 

G12D

56.1

  

mut

24

140

WT a

 

WT

   

WT

25

7

mut

 

G12C

61.2

  

mut

26

4

WT a

 

WT

   

WT

27

27

WT a

 

WT

   

WT

28

13

WT a

 

WT

   

WT

29

207

mut

 

G12D

54.5

  

mut

30

10

failed

WT

G12V

1.5

  

WT b

31

54

WT a

 

WT

   

WT

32

120

mut

 

G12V

29.2

  

mut

33

33

failed

mut

G12C

33.5

  

mut

34

N/A

mut

 

G12C

71.4

  

mut

35

N/A

WT

 

WT

   

WT

36

N/A

failed

 

WT

   

WT

37

67

WT a

 

WT

   

WT

38

137

mut

 

G12C

76.7

  

mut

39

63

mut

 

G12A

56

  

mut

40

13

WT a

 

WT

   

WT

41

113

WT a

 

WT

   

WT

42

82

mut

 

G12C

75.4

  

mut

43

39

WT

 

WT

   

WT

44

7

WT a

 

G12S

2

  

WT b

45

23

WT a

 

WT

   

WT

46

24

faileda

 

G13D

3.5

  

WT b

47

9

WT a

 

WT

   

WT

48

34

WT a

 

G12S

2

  

WT b

49

25

WT a

 

WT

   

WT

50

17

WT

 

WT

   

WT

51

5

WT a

 

WT

   

WT

52

29

WT a

 

WT

   

WT

53

31

mut

 

G12D

71.3

  

mut

54

68

WT

 

WT

   

WT

55

93

mut

 

G12D

74.2

  

mut

56

221

WT

 

WT

   

WT

57

83

WT

 

WT

   

WT

58

N/A

WT a

 

G12V

1.2

  

WT b

59

35

mut

 

G12D

83.3

  

mut

60

N/A

WT

 

WT

   

WT

61

37

WT a

 

WT

   

WT

  1. aSkewed HRM curve
  2. bLOD/threshold for potential low level mutation (cf. Therascreen KRAS Pyro Kit handbook version 1, July 2011): G12D 2.2 %/5.2 %, G12V 1.0 %/4.0 %, G12C 2.1 %/5.1 %, G12S 1.9 %/4.9 %, G13D 1.9 %/4.9 %